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单细胞转录组测序

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       单细胞转录组测序(single cell RNA-seq, scRNA-seq),是在单个细胞水平对 mRNA 进行高通量测序的一项新技术,其能够以高通量和单分子分辨率研究单个细胞表达谱,揭示复杂细胞群体的异质性,避免单个细胞的基因表达信号被群体的平均化所掩盖。 

       10x Genomics系统具有高通量、周期短、适用范围广等优势,一个样品可进行1000~10000个细胞转录组分析;6.5min可完成上万细胞的封装,一天内完成单细胞捕获、反转录扩增与建库;相较其他平台,单个细胞的测序成本低;适用于绝大部分的细胞类型,包括生殖细胞、胚胎细胞、血细胞、神经细胞、肿瘤细胞、免疫细胞、干细胞等。


技术原理 

10× Genomics的Chromium系统利用8通道的微流体“双十字”交叉系统将含barcode的凝胶珠(Gel Beads)、细胞和酶的混合物、油三者混合,形成GEMs(油包水的微体系)GEMs形成后,细胞裂解,凝胶珠自动溶解释放大量barcode序列随后mRNA逆转录产生带有10× barcode和UMI信息的cDNA,构建标准测序文库下图展示Chromium Single Cell 3’ Solution 中mRNA逆转录产生带有10× barcode和UMI信息的cDNA过程

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应用领域
1. 发育生物学:胚胎、神经、脑等各种组织;
2. 细胞图谱绘制;

3. 干细胞分化潜能研究;
4. 免疫研究;
5. 肿瘤异质性与耐药性研究。

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